高效液相色譜中所使用的載體，其顆粒直徑多數為5～10μm，阻力很大，只有在色譜柱的入口端施加很大的壓力才能使流動相以合適的流速通過色譜柱，故高效液相色譜必須使用高壓泵。高壓泵又分為恒壓泵和恒流泵兩種基本類型。無論是哪種類型的高壓泵，都必須滿足以下基本要求：

　　(1)具有較高的輸出壓力。應能輸出10～30MPa，有的高效液相色譜儀的輸出壓力高達50MPa左右。

　　(2)能使流動相以無脈沖的方式進入色譜柱。這是由于高效液相色譜儀的檢測器極為敏感，流動相流速的脈沖變化將在檢測器上產生響應，在記錄儀上表現為噪音，從而使整個系統靈敏度下降。

　　(3)耐腐蝕性強。由于用作高效液相色譜的許多溶劑具有腐蝕性，所以高壓泵必須能抗溶劑的腐蝕。

　　(4)輸送流動相的速度精確度要高，重復性要好，以得到可重復的分析結果。

　　(5)泵的死體積要小，以便于迅速更換溶劑和梯度洗脫。

　　幾種常用的高壓泵

　　(1)恒流泵。恒流泵能輸出恒定的流量。這種泵的輸出流量與外界因子(如色譜柱等)的阻力無關。常見的恒流泵有恒流注射泵和往復泵兩種類型，其中往復泵又分為柱塞式往復泵和隔膜式往復泵。

　　恒流注射泵：它相當于一個大的醫用注射器，泵體由不銹鋼制成，容積約為幾十到幾百毫升。步進電機通過齒輪帶動螺桿，使柱塞成直線運動，將液缸中的液體以高壓排出，其流量借調節步進電機的轉速加以控制。這種泵的優點是壓力平穩無脈沖，輸出壓力高達50MPa，缺點是液缸中液體的量有限，一次排完后需停泵，待重新吸滿液體后才能繼續輸出液體，這種情況下可用雙泵交替加以克服。

　　柱塞式往復泵：其原理與一般的高壓供液泵大同小異。步進馬達通過一凸輪帶動活塞，在泵室內以每分鐘幾十次到一百多次的速度往復運動。當活塞向下移動時，流動相自入口單向閥吸入泵室；當活塞向上移動時，入口單向閥受壓關閉，流動相自出口單向閥輸出。當活塞再次下移時，管路中流動相的外壓使出口單向閥關閉，同時流動相又經入口單向閥吸入泵室，如此反復進行。流動相的流量通過改變活塞的沖程以及改變馬達的轉速得以實現。這種泵的優點是泵室體積小(100～200μl)，活塞往復移動快，容易清洗及更換流動相，從而克服了注射泵的主要缺點。但卻有輸出流量脈沖大的缺點，故需外加脈沖阻尼裝置，以使壓力平穩。因此可見，將這類泵視為，恒流泵”不十分嚴格，嚴格講，應稱為“恒平均流量泵”。

　　隔膜式往復泵：原理與柱塞式往復泵相似，所不同的是與液體接觸的不是柱塞，而是用不銹鋼或氟碳聚合物制成的彈性隔膜，這樣使液體與柱塞隔開，不僅降低了對柱塞和密封圈的要求，而且還可加潤滑油，使柱塞更加光滑，提高了柱塞的運動頻率和使用壽命。

　　(2)恒壓泵。恒壓泵的特點是輸出壓力保持恒定，而輸出流流速不定。流速的大小取決于泵的輸出壓力、色譜柱長度、填充物的粒度、填充情況及流動相的粘度等因素。通常用的恒壓泵為氣動放大泵，簡稱氣動泵。氣動泵的工作原理是：首先壓縮空氣充滿泵室，作用于耐壓板而帶動活塞向下移動，結果使出口單向閥關閉，入口單向閥打開，從而使流動相流入泵室。當泵室充滿時，氣動控制器中的壓縮空氣通過氣閥而流向耐壓板的下部，這樣使得耐壓板受到向上的推動力，而帶動活塞向上移動，結果入口單向閥關閉，出口單向閥打開，流動相流向色譜柱。泵容積一般為2～60ml。氣動泵能輸出高壓流動相的原理是控制器中耐壓板的橫截面積比活塞大許多(一般為45倍)，按壓強定律，活塞受壓與活塞面積成反比。